XL10-Gold Chemically Competent Cell

基因型：

TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15Tn10 (TetR) Amy CamR]

簡要說明：

XL10-Gold是目前轉化效率高的感受態細胞，由Stratagene開發的特異性用于大質?；蛘滟F連接產物轉化或構建文庫的超級感受態細胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene開發的特異性提高感受態轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40kd質粒的構建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統；同時缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性；TetR， CamR賦予菌株四環素和LU霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選。High5TM系列XL10-Gold感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>2×109cfu/μg。

操作說明：

1.XL10-Gold感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreasessharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds orfor >40 seconds.），迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。 

2.混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。 

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

 4.XL10-Gold菌株對 <40 µg/mlLU霉素有抗性，但對100 µg/mlLU霉素敏感。 

5.High5TM系列XL10-Gold感受態細胞采用常規轉化方法，轉化效率可達2×109cfu/μg ；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標準protocol。